产品规格：20 μL×100T, 20 μL×500T

产品内容：

注：Supermix包含SYBR Green Ⅰ，dNTPs，热启动DNA聚合酶，Mg²⁺，ROX Reference Dye等。

使用方法

一. 储备溶液的制备

1. 将2×Universal SYBR Green qPCR Supermix取出恢复至室温并上下颠倒充分混匀，同时准备实验所需的引物、模板、RNase-free水。

2. 在qPCR管中配制如下混合液：

注：使用前请充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。反应体系中各成分的量可根据以下原则进行调整：

1）引物浓度：通常引物浓度为0.4 μM可得到较好的扩增效果。当扩增效果较差时，可以在终浓度0.1~1.0 μM范围内调整引物浓度。

2）模板浓度：cDNA作为模板时的添加量不要超过qPCR反应总体积的10%。cDNA原液建议5~10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的CT值在20~30个循环最好。

3）体系配制：反应体系配制时请于超净台内进行，配制过程中请使用灭菌枪头和反应管，条件容许的实验室推荐使用专用的移液枪和带滤芯的枪头。

3. 按下列条件进行qPCR反应

扩增程序（两步法）

扩增程序（三步法）

注：高特异性可以选择两步法，高效率可以选择三步法。

1）预变性时间：该预变性条件适合绝大多数扩增反应，如果遇到结构比较复杂的基因可适当的增加预变性的时间。

2）退火和延伸时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。

3）溶解曲线：仪器类型不同，溶解曲线采集程序不尽相同，使用仪器默认溶解曲线采集程序即可。

注意事项

1. Supermix 解冻后可能会出现些许白色沉淀，请提前恢复至室温并上下颠倒充分混匀，沉淀溶解后使用。

2. 配制qPCR混合液时吹打要轻，如果有气泡产生，需要短暂离心后使用。

3. 由于本品中含有荧光染料和参比染料，因此需要-20℃避光保存。

4. 本品灵敏度高，容易被空气中的气溶胶污染，因此反应配制时请于超净工作台内进行，配制过程中请使用灭菌枪头和反应管。

5. 为了保证产品的扩增效果，应尽量避免反复冻融，Supermix解冻后短期可置于2~8℃避光保存或者如果使用量较小，推荐小份分装使用。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。